NK細胞與腫瘤
NK 細胞在 20 世紀 70 年代首次被確認為一種獨特的淋巴亞型細胞，能夠在沒有預先致敏或檢測特定腫瘤抗原的情況下識別并快速殺死異常細胞，從而能夠起到抗腫瘤作用。目前，基于自然殺傷（NK）細胞的免疫療法已成為癌癥免疫療法中一個有前途的前沿科學研究課題。
NK/CAR-NK 細胞的來源和生成過程
1. 通過NK膜表面的 Fc 受體CD16 在NK 細胞殺傷腫瘤細胞中起到重要作用，NK 細胞通過膜受體CD16 或通過FASL 和TRAIL 介導的凋亡途徑引發 ADCC；
2. 誘導NK細胞向一種或多種TAAs 的BiKE 和TRiKEs 是治療實體瘤的可行策略;
3. CARs將NK細胞重新定向到具有特異性抗原的腫瘤細胞上，能夠精準清除腫瘤細胞。
NK 細胞對腫瘤的細胞毒性機制
外周血來源NK細胞-80°C短期凍存
12周內NK細胞活性無明顯變化
研究人員采集和分離健康人外周血單個核細胞，在體外培養擴增細胞，擴增12天后將部分NK細胞于-80C凍存1/4/12/24周。
通過流式細胞儀分析凍存不同時間的NK細胞的表型、凋亡百分率、顆粒酶B、穿孔素及CD107a表達。如下圖所示，-80°C凍存24周的NK細胞與未凍存的NK細胞的表型、活性、顆粒酶B、穿孔素及CDl07a表達相比，差異有統計學意義(P<0.05)。而-80°C凍存12周內的NK細胞與未凍存的NK細胞各組相比，差異無統計學意義(P>0.05)。
研究表明，-80°C凍存12周以內的NK細胞與未凍存的NK細胞比較，在表型和凋亡百分率方面均無明顯變化，且細胞功能及殺傷活性也無明顯改變，而腫瘤患者化療的一個療程大約為4周，因此-80°C凍存細胞可以滿足大多數患者的需要。
臍帶血來源的NK細胞冷凍10年
擴增能力和效應功能沒有影響
臍帶血（CB）是治療性抗腫瘤效應NK細胞體外擴增的一個重要來源，從臍帶血可以獲得大量淋巴細胞效應細胞，這擴大了其臨床潛力，甚至在治療血液病方面超過了造血干細胞（HSC）移植。
比如，治療性的離體擴增NK細胞可用于過繼性細胞免疫療法，可在臨床上應用于治療血液系統和實體惡性腫瘤。
全球范圍內儲存了超過600,000單位的臍帶血，驗證這種冷凍來源NK細胞的治療能力非常重要。盡管已有研究證明了在造血干細胞移植中使用長期冷凍保存臍帶血的臨床功效，但對其用于效應免疫細胞離體擴增的效果卻知之甚少。
來自新鮮、短期冷凍保存或長期冷凍保存臍帶血的CB-NK細胞具有類似的、穩健的對數規模擴增
研究人員從臍帶血中分離并體外擴增了大量激活的NK細胞，根據凍存時間長短，將臍帶血分為三個組別:長期組 (深低溫凍存1-10年)、短期組(深低溫凍存小于1年)、未凍存組(未經凍存的臍帶血)，然后對這些NK細胞殺傷乳腺癌細胞的作用進行了觀察其擴增潛力和抗腫瘤效應功能。
研究發現，培養28天后，未凍存組、短期組、長期組的臍帶血來源NK細胞都產生了類似的、穩定的指數級別擴增量，沒有顯著差異。同時離體擴增的臍帶血來源NK細胞具有增加的激活標志物的表面表達，并通過產生穩定水平的促炎細胞因子，干擾素v和腫瘤壞死因子-a顯示出有效的抗腫瘤功能。
文中所述這兩種不同來源的NK細胞相比，臍帶血來源的NK細胞收集和冷凍保存更加便捷，且長期冷凍保存對臍帶血NK細胞的擴增潛能和抗腫瘤活性均沒有影響。外周血NK細胞（不是PBMC）在短期（12周內）凍存是沒有影響的，但再延長凍存期的話可能會顯示一定的局限性。